Pemeriksaan HBsAg

Salah satu pemeriksaan cepat untuk deteksi  kualitatif Antigen Hepatitis B permukaan (HbsAg) pada serum atau plasma.

Tujuan Penggunaan

HbsAg tes strip (Serum/plasma) adalah pemeriksaan langsung kromatografi immunoassay untuk pemeriksaan kualitatif HbsAg dalam serum atau plasma.

Rangkuman

Penyebab hepatitis adalah penyakit sistemik yang terutama berhubungan dengan hati. Kebanyakan penyebab kasus hepatitis akut  adalah oleh virus Hepatitis A, Hepatitis B (HBV) atau Virus Hepatitis C. Antigen kompleks ditemukan pada permukaan HBV yang dikenal dengan HbsAg. Model terdahulu disebut Australian atau Au antigen.

Adanya HbsAg pada serum atau plasma sebagai indikasi pada infeksi hepatitis B yang aktif, juga infeksi akut atau kronik. Pada tipikal infeksi hepatitis B, HbsAg akan dideteksi 2 sampai 4 minggu sebelum kadar ALT menjadi abnormal dan 3 sampai 5 minggu sebelum gejala atau penyakit kuning berkembang. HbsAg mempunyai 4 subtipe prinsip: adw, ayw , adr dan ayr. Karena faktor heterogenitas antigenik ada 10 serotipe mayor pada virus hepatitis.

Tes HbsAg  (serum/plasma) pada tes langsung untuk pemeriksaan kualitatif adanya HbsAg pada spesimen serum atau plasma. Tes ini memanfaatkan kombinasi antibodi monoklonal dan poliklonal mendeteksi peningkatan kadar HbsAg pada serum atau plasma.

Prinsip

HBsAg One Step Hepatitis B Surface Antigen Test Strip (Serum/Plasma) adalah tes kualitatif imunoligi secara aliran lateral untuk mendeteksi HbsAg pada serum/plasma. Membran dilapisi dengan anti antibodi HBsAg poliklonal di garis tes. Selama tes berlangsung spesimen serum atau plasma berekasi dengan partikel yang dilapisi dengan anti-HBsAg antibodi monoklonal. Campuran tersebut akan bergerak sepanjang membran secara kapilaritas dan bereaksi dengan anti-HBsAg antibody poliklonal pada membran dan menghasilkan garis berwarna. Munculnya garis berwarna pada garis tes mengindikasikan hasil positif dan jika tidak ada garis berwarna pada garis tes menandakan hasil negatif. Sebagai prosedur kontrol, garis berwarna harus selalu muncul pada garis kontrol yang menandakan volume sampel cukup dan telah mengisi membran.

Reagen

Tes strip mengandung partikel anti-HBsAg dan anti-HBsAg yang dilapiskan pada membran.

Tindakan Pencegahan

·           Untuk diagnosa in vitro profesional. Jangan digunakan setelah tanggal kadaluarsa.

·           Jangan makan, minum atau merokok di area dimana spesimen atau kit sedang digunakan.

·           Perlakukan semua spesimen seperti bahan infeksius. Amati tindakan pencegahan terhadap resiko bahaya mikrobiologi seluruh pengujian dan ikuti prosedur standar untuk pembuangan spesimen.

·           Gunakan pakaian pelindung seperti jas laboratorium, sarung tangan disposable dan pelindung mata ketika spesimen sedang diperiksa.

·           Kelembaban dan suhu dapat mempengaruhi hasil.

Penyimpanan dan Stabilitas

Kit dapat disimpan pada temperature kamar atau pendingin (2-30^oC). Tes strip tetap stabil sampai tanggal kadaluarsa yang tertera pada kemasan, Tes strip harus tetap dalam kantong tertutup sampai digunakan.

Jangan dibekukan. Jangan digunakan melebihi tanggal kadaluarsa.

Pengumpulan dan Persiapan Spesimen

Pisahkan serum atau plasma dari darah.

·           HbsAg one step antigen permukaan tes strip hepatitis B (Serum/Plasma) dapat dilihat menggunakan sempel selain serum atau plasma.

·           Pisahkan serum atau plasma darah dari darah sesegera mungkin untuk menghindari hemolisis. Hanya spesimen yang jernih dan tidak hemolisis yang dapap digunakan.

·           Pengujian harus dilakukan segera setelah specimen telah dikumpulkan. Jangan tinggalkan spesimen di suhu ruangan untuk memperpanjang periode. Specimen harus disimpan pada suhu 2^o-8^o C agar dapat bertahan 3 hari. Untuk masa penyimpanan yang lama, spesimen harus disimpan dibawah -20^oC.

·           Bawa specimen ke suhu ruangan lebih dahulu untuk pengujian. Bekuan spesimen harus sepenuhnya di cairkan dan dicampur dengan baik untuk pengujian. Spesimen tidak boleh dibekukan dan dicairkan ulang.

·           Jika spesimen akan dikirim, spesimen harus dikemas sesuai dengan federal, negara atau regulasi total untuk pengiriman agen etiologi.

Bahan

Bahan yang disediakan :

·           Tes strip

·           Kemasan didalam

Bahan yang dibutuhkan tapi tidak disediakan :

·           Tempat pengumpulan spesimen

·           Centrifuge (hanya untuk plasma)

·           Timer

Petunjuk

Pastikan tes strip, spesimen serum atau plasma, dan/atau kontrol agar sama dengan suhu kamar (15-30⁰C) sebelum pemeriksaan.

1.        Bawa kemasan pada suhu kamar sebelum di buka. Keluarkan tes strip dari kemasan dan segera gunakan. Hasil terbaik akan diperoleh bila assay dilakukan dalam satu jam.

2.        Dengan panah menunjuk ke arah spesimen plasma atau serum. Celupkan tes strip secara vertikal pada serum atau plasma setidaknya selama 10-15 detik. Jangan melewati garis batas maksimum (MAX) pada tes strip saat mencelupkan tes strip. Lihat ilustrasi dibawah.

3.        Tempatkan tes strip pada permukaan datar yang tidak dapat menyerap, mulai hitung waktu dan tunggu sampai garis merah muncul. Hasilnya harus dibaca pada 15 menit.

Catatan : konsentrasi HbsAg yang rendah akan muncul dalam garis lemah pada area tes (T) setelah melampaui jangka waktu, oleh karean itu jangan membaca hasil setelah lebih dari 30 menit. 

Interpretasi
Positif : *Muncul dua garis merah yang berbeda. Satu baris harus dalam daerah kontrol ( C ) dan garis lain harus dalam daerah tes (T ) .
*Catatan : Intensitas warna merah di wilayah garis uji (T ) akan bervariasi tergantung pada konsentrasi HBsAg yang hadir dalam spesimen . Oleh karena itu , apapun warna merah di wilayah uji ( T) harus dianggap positif .

Negatif : Satu garis merah  muncul di daerah kontrol ( C ) .  Tidak muncul garis merah atau merah muda di wilayah uji (T ) .

Invalid : Garis kontrol tidak muncul. Volume spesimen yang tidak memadai atau teknik prosedural yang salah adalah alasan yang paling mungkin untuk kesalahn ini . Tinjau prosedur dan ulangi tes dengan strip tes baru . Jika masalah berlanjut , segera hentikan menggunakan test kit  dan hubungi distributor lokal Anda .

Kualitas
Prosedural kontrol disertakan dalam ujian . Sebuah garis merah muncul di daerah kontrol ( C ) adalah prosedur kontrol internal. Hal itu menegaskan volume spesimen yang cukup dan teknik prosedural yang benar .

Standar kontrol ini tidak disertakan dengan kit ini , bagaimanapun , dianjurkan bahwa kontrol positif ( mengandung 10ng/ml HBsAg ) dan kontrol negatif (mengandung 0 ng / ml HbsAg ) diuji sebagai praktek laboratorium yang baik untuk mengkonfirmasi prosedur tes dan untuk memverifikasi kinerja tes baik.

Batasan

1.        HbsAg One Step Hepatitis B Antigen Tet Strip (serum/plama) digunakan untuk diagnosis in vitro saja. Tes ini dapat digunakan untuk deteksiHBsAg dalam spesimen serum atau plasma.

2.        HbsAg One Step Hepatitis B Antigen Tet Strip (serum/plama) hanya akan mengindikaikan adanya HBAg dalam spesimen dan tidak dapat digunakan sebagai kriteria satu-satunya untuk mendiagnosis infeksi virus Hepatitis B.

3.        Seperti lainnya semua hasil pemeriksaan harus dipertimbangkan dengan informasi klinik yang tersedia kepada dokter.

4.        HbsAg One Step Hepatitis B Antigen Tet Strip (serum/plama) tidak dapat mendeketsi kadar HbsAg dalam spesimen lebih kecil dari 1ng/mL. Jika hasil pemeriksaan negatif dan gejala klini masih menetap, pemeriksaan lanjutan menggunakan metode klinik yang disarankan. Hasil negatif tidak menghilangkan kemungkinan infeksi Hepatitis B.

Nilai

HbsAg One Step Hepatitis B Antigen Tet Strip (serum/plama) telah dibandingkan dengan pemeriksaan HbsAg EIA komersil terkemuka. Korelasi antara kedua sistem ini lebih dari 98%.

Karakteristik

HbsAg One Step Hepatitis B Antigen Tet Strip (serum/plama) telah diperiksa oleh panel sensitivitas dengan rentang 0 sampai 300ng/mL. Semua sutipe HbsAg menunjukan hasil positif pada HbsAg One Step Hepatitis B Antigen Tet Strip (serum/plama). Tes dapat mendeteksi HbsAg 5ng/mL dalam 15 menit, dan 1ng/mL HBAg dalam 30 menit.

Sensitifitas

Antibodi yang digunakan untuk alat HbsAg One Step Hepatitis B Surface Antigen test strip(Serum/plasma).  Telah dirancang untuk melawan seluruh antigen Hepatitis B yang diisolasi dari hepatitis B virus. Spesifitas dari HbsAg One Step Hepatitis B Surface Antigen test strip(Serum/plasma)

Telah diuji pula dengan strain laboratorium dari hepatitis A dan hepatitis C. Hasil menunjukan Hepattis A dan C negativ.

Metode referensi HbsAg

Metode		EIA		Hasil total
HbsAg Strip tes	Hasil	Positif	Negatif
	Positif	157	5	162
	Negatif	0	164	164
Hasil total		157	169	326

Sensitifitas relatif        :>99.0%

Spesifisitas relatif        : 97,07%

Ketepatan                    : 98,5 %

Presisi

Intra assay

Pada pengujian within run, presisi didapat menggunankan 15 pengulangan dari 3 spesimen yang mengandung 0 ng/ml, 1 ng/ml, 5 ng/ml dari HbsAg. Hasil negatif dan positif telah dengan benar di identifikasi 98% pada waktu itu.

Inter assay

Pada pengujian Between run , perisis didapat dari penggunaan 3 spesimen yang sama, 0 ng/ml, 1 ng/ml, 5 ng/ml, dari hbsAg dalam 15 pengujian mandiri. Hasil lot yang berbeda dari HbsAg One Step Hepatitis B Surface Antigen test strip(Serum/plasma). telah di uji lebih dari 3 bulan dengan menggunakan negatif, positif rendah, dan positif tinggi. Sampel dapat didentifikasi 98%pada saat itu.